APLICAÇÃO DE FT-IR E QUIMIOMETRIA PARA DISCRIMINAÇÃO DE TUMORES PRIMÁRIOS DE MAMA SUPERVISIONADOS POR IMUNO-HISTOQUÍMICA

Resumo

Apesar de o câncer estar se tornando a principal causa de morte ao redor do mundo suas técnicas de diagnóstico são, muitas vezes, invasivas e apresentam resultados inconsistentes. Um dos métodos mais utilizados atualmente é a biópsia por agulha grossa (core biopsy), que consiste na retirada de fragmentos tumorais (provenientes de tumores primários no caso dessa pesquisa) para posterior análise em laboratório, o que demanda tempo, um profissional especializado e pode resultar em diagnósticos imprecisos. Nesse âmbito a área imuno-histoquímica (IHQ) possui um caráter fundamental na classificação dos subgrupos da doença, informação que auxilia na determinação dos fatores prognósticos e até alvos terapêuticos específicos. Essa especificação baseia-se na análise semiquantitativa de biomarcadores presentes na biópsia, destacando-se para o câncer de mama, o Human Epidermal growth factor Receptor 2 (HER2), receptor de Progesterona (RP), receptor de Estrogênio (RE) e marcador de proliferação KI-67 (KI-67). A partir dessa identificação as biópsias foram classificadas em; Luminal A, Luminal B, HER2+ e triplo negativo. A Espectroscopia de Absorção Molecular no Infravermelho com transformada de Fourier (FT-IR) surge como uma alternativa rápida, sensível, precisa e limpa, predominantemente na identificação dos padrões da doença. Os objetivos deste estudo foram utilizar a análise Discriminante com Calibração Multivariada por Mínimos Quadrados Parciais (PLS-DA) para 1) diferenciar espectros de pacientes com câncer de mama inicial de mulheres normais; 2) classificar os espectros de acordo com o tipo imuno-histoquímico. Este estudo transversal utilizou 75 amostras de plasma, dentre eles: 56 de pacientes cancerosos e 19 de indivíduos controle. As amostras de plasma foram depositadas em alíquotas de 1,0 µL foram depositadas no cristal de leitura e desidratadas em corrente de ar (60-65ºC) por 1,5 min. As leituras foram realizadas em triplicata em espectrômetro Spectrum™ 400 FT-IR/FT-NIR no modo de refletância total atenuada (ATR-FTIR), na faixa de 4000-650 cm-1, com resolução espectral de 4 cm-1 e 4 pulsos de varredura. Os espectros foram normalizados e a análise multivariada foi realizada através da PLS-DA das triplicatas de cada amostra (n = 75). Após isso as amostras de pacientes oncológicos ficaram subdivididas, de acordo com o tipo IHQ, da seguinte maneira: 31 Luminal A (55,4%), 10 Luminal B (17.9%), 12 HER2 (21,4%) e 3 triplo negativo (5,4%). Foram obtidos dois modelos. O primeiro discriminou indivíduos cancerosos de saudáveis. O segundo modelo, mais robusto, diferenciou pacientes com diferentes diagnósticos IHQ, entre si e dos pacientes saudáveis. Os dois modelos apresentaram sensibilidade e especificidade de 100% com raiz quadrada do erro médio de calibração abaixo de 0,001 e coeficientes de determinação R2 acima de 0,999. A utilização da FT-IR mostrou precisão na distinção, tanto entre amostras com câncer de mama e as saudáveis, quanto entre as subdivisões IHQ. A sensibilidade apresentada pelo método, apesar da pequena quantidade de amostras, demonstra o potencial das técnicas como alternativa a biópsia por agulha grossa (core biopsy) na aplicação clínica.