DESENVOLVIMENTO DE MÉTODOS MOLECULARES PARA DIAGNÓSTICO DE BACTEREMIA
Resumo
INTRODUÇÃO: A bacteremia é uma importante infecção relacionada à assistência à saúde
(IRAS), apresentando riscos notáveis de morbimortalidade, prolongando internações e
aumentando gastos hospitalares. Atualmente, a hemocultura é o padrão-ouro para
diagnóstico desta IRAS, porém seu resultado é demorado. A fim de agilizar o diagnóstico,
novas técnicas moleculares estão sendo desenvolvidas para identificar o agente
patogênico e seu respectivo perfil de susceptibilidade antimicrobiana. Desta maneira temse
um resultado precoce minimizando o uso inadequado de antibióticos. OBJETIVO:
Desenvolver métodos moleculares no diagnóstico de bacteremia e na detecção de genes
envolvidos na resistência antimicrobiana. METODOLOGIA: Na primeira etapa, será
desenvolvido uma técnica de PCR em tempo real (qPCR), para diagnóstico de bacteremia.
Inicialmente, indivíduos saudáveis irão doar amostras de sangue, as quais serão
contaminadas com cepas ATCC de bactérias e fungos. Após, será extraído o DNA
bacteriano e realizada a técnica de detecção do microrganismo e seu respectivo gene de
resistência, sendo respectivamente pelo o método TaqMan e Syber Green. Em uma
segunda etapa, será aplicada a qPCR desenvolvida em pacientes internados na UTI adulto
de hospital de ensino, os quais devem apresentar suspeita de infecção da corrente
sanguínea. Serão coletadas amostras de sangue com EDTA destes pacientes durante o
período de setembro a dezembro de 2017. Após, serão realizadas as técnicas de extração
de DNA e qPCR desenvolvidas. Para calcular a sensibilidade, especificidade deste método,
serão utilizados os resultados das hemoculturas automatizadas realizadas no mesmo
período da coleta das amostras disponibilizado pelo laboratório de apoio do hospital. Será
utilizado para as análises estatísticas o programa SPSS 23.0. Este estudo faz parte de um
projeto-mãe, previamente aprovado pelo CEP/UNISC, sob Parecer de nº: 1.540.110/2016.
RESULTADOS ESPERADOS: Espera-se padronizar um método para diagnóstico de
bacteremia, com alta sensibilidade e especificidade. Além disso, se visa diminuir as taxas
de morbimortalidade por bacteremia em pacientes internados, reduzindo
consequentemente os gastos com medicamentos e internação.
(IRAS), apresentando riscos notáveis de morbimortalidade, prolongando internações e
aumentando gastos hospitalares. Atualmente, a hemocultura é o padrão-ouro para
diagnóstico desta IRAS, porém seu resultado é demorado. A fim de agilizar o diagnóstico,
novas técnicas moleculares estão sendo desenvolvidas para identificar o agente
patogênico e seu respectivo perfil de susceptibilidade antimicrobiana. Desta maneira temse
um resultado precoce minimizando o uso inadequado de antibióticos. OBJETIVO:
Desenvolver métodos moleculares no diagnóstico de bacteremia e na detecção de genes
envolvidos na resistência antimicrobiana. METODOLOGIA: Na primeira etapa, será
desenvolvido uma técnica de PCR em tempo real (qPCR), para diagnóstico de bacteremia.
Inicialmente, indivíduos saudáveis irão doar amostras de sangue, as quais serão
contaminadas com cepas ATCC de bactérias e fungos. Após, será extraído o DNA
bacteriano e realizada a técnica de detecção do microrganismo e seu respectivo gene de
resistência, sendo respectivamente pelo o método TaqMan e Syber Green. Em uma
segunda etapa, será aplicada a qPCR desenvolvida em pacientes internados na UTI adulto
de hospital de ensino, os quais devem apresentar suspeita de infecção da corrente
sanguínea. Serão coletadas amostras de sangue com EDTA destes pacientes durante o
período de setembro a dezembro de 2017. Após, serão realizadas as técnicas de extração
de DNA e qPCR desenvolvidas. Para calcular a sensibilidade, especificidade deste método,
serão utilizados os resultados das hemoculturas automatizadas realizadas no mesmo
período da coleta das amostras disponibilizado pelo laboratório de apoio do hospital. Será
utilizado para as análises estatísticas o programa SPSS 23.0. Este estudo faz parte de um
projeto-mãe, previamente aprovado pelo CEP/UNISC, sob Parecer de nº: 1.540.110/2016.
RESULTADOS ESPERADOS: Espera-se padronizar um método para diagnóstico de
bacteremia, com alta sensibilidade e especificidade. Além disso, se visa diminuir as taxas
de morbimortalidade por bacteremia em pacientes internados, reduzindo
consequentemente os gastos com medicamentos e internação.
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