Desenvolvimento de primers para identificação e diferenciação de espécies de Candida em secreção vaginal por PCR em tempo real (qPCR)

Abstract

Infecções fúngicas são cada vez mais frequentes, principalmente relacionadas ao sistema geniturinário e causadas por Candida spp. A PCR mostra-se promissora para o diagnóstico e para sua aplicação faz-se necessário o desenvolvimento de primers. Para isso obteve-se sequências da região ITS do rDNA 18S de 5 espécies de Candida, alinhou-se e verificou-se os tamanhos dos amplicons e as Tms teóricas. Cepas padrão e cepas cultivadas foram utilizadas como referência. Além disso, 67 amostras de DNA de secreção vaginal foram submetidas a qPCR e os resultados foram confirmados em gel de agarose 2%. Os testes in silico demonstraram a capacidade do par de primers em diferenciar as cinco espécies, o que foi confirmado após a amplificação das cepas padrão e de amostras de secreção vaginal, identificadas em 20 amostras. O limite de detecção foi de 58 células/mL para as cepas padrão de C. albicans e C. tropicalis e 29 células/mL para C. parapsilosis. A sensibilidade da qPCR frente ao teste de crescimento microbiológico foi de 68%, com especificidade de 90%. A técnica possui potencial de diagnóstico, porém precisa ser otimizada para testes quantitativos.