Mostra de Extensão, Ciência e Tecnologia da Unisc

Introdução: As epidemias causadas por arbovírus no Brasil estão diretamente associadas à ampla disseminação das populações do mosquito Aedes aegypti, sendo a dengue uma das mais recorrentes doenças causadas por este vetor. Ferramentas de análise de distribuição espacial são estratégias para o monitoramento da evolução da epidemia nas regiões possibilitando uma rápida resposta sanitária no combate ao vetor. Objetivo: Padronizar uma reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR) para a detecção da presença do vírus da dengue em populações de mosquitos Aedes aegypti. Material e método: Foi realizado um estudo transversal retrospectivo, utilizando os registros diários do serviço antivetorial da Vigilância Sanitária do município de Vera Cruz e os dados das notificações de casos de dengue no período de 2017 a 2021, a fim de estabelecer os locais com o maior índice de infestação das larvas de Aedes aegypti e assim delimitar os locais para a instalação de armadilhas para a coleta de fêmeas adultas do mosquito. As amostras coletadas foram enviadas ao Laboratório da UNISC, onde foi realizada a padronização de um protocolo para a identificação do vírus da dengue nos mosquitos capturados. A preparação dos mosquitos foi feita através de pools contendo de 4 a 5 mosquitos que foram transferidos para um eppendorf contendo 350ul de solução tampão TE e macerados até a completa homogeneização, em seguida foram centrifugados a 4000rpm em centrífuga refrigerada a 4°C por vinte minutos. O processo de extração do RNA foi realizado através de beads magnéticas, utilizando o kit comercial "MagMaX™CORE Nucleic Acid Purification Kit". A detecção do vírus da dengue foi realizada através do RT-qPCR utilizando o equipamento QuantStudio (Thermo Fischer Scientific) e o sistema AGPATH que possui os componentes necessários para a etapa de transcrição reversa, e para a amplificação foram utilizadas sondas e primers que amplificam especificamente o gene alvo do DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4. Resultados: Durante o período de teste das armadilhas foram coletados 46 mosquitos adultos, que foram divididos em 10 pools de acordo com a armadilha e bairro onde foram coletados. Cada pool continha de 4 a 5 mosquitos. Foram testadas diferentes condições de preparação dos mosquitos utilizando água ultrapura destilada e solução tampão TE, sendo que a última apresentou os melhores resultados de concentração do RNA da amostra. A padronização da RT-qPCR  foi realizada utilizando como controle positivo uma amostra de caso humano positivo para dengue obtido do Laboratório Central (LACEN/RS). As temperaturas e ciclagens foram definidas utilizando as mesmas condições do protocolo da rotina do diagnóstico de Covid-19, adaptado do protocolo de Charité. Após a padronização com amostra humana, foram utilizados 10 pools de mosquitos, controle positivo (amostra de dengue) e um controle negativo (água). Após a testagem foram positivos para DENV-1 4 pools de mosquitos. Os casos positivos serão confirmados por sequenciamento, e enviados ao LACEN/RS para confirmação. Conclusão: Foi possível padronizar uma técnica de RT-qPCR para identificação do vírus da dengue em amostras de mosquito Aedes aegypti. O rastreamento de mosquitos contaminados é fundamental para delimitar as zonas de risco de contaminação para a transmissão do vírus aos seres humanos, além de ser importante para delimitar as áreas para a utilização de agentes químicos ou biológicos para controle da infestação por Aedes aegypti.