IDENTIFICAÇÃO FENOTÍPICA DA ENZIMA METALO-BETA-LACTAMASE E PESQUISA DA PRESENÇA DOS GENES CODIFICADORES BLASPM-1, BLAIMP-1 E BLAVIM-1 EM CEPAS DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA

Resumo

Introdução: Pseudomonas aeruginosa é um bastonete gram-negativo, sendo um patógeno ambiental oportunista extremamente comum em amostras de aspirado traqueal em Unidade de Terapia Intensiva (UTI). A resistência aos carbapenêmicos e cefalosporinas está se tornando um problema terapêutico mundial e a produção de metalo-beta-lactamases tem emergido como um dos mecanismos responsáveis por esta resistência. Essas enzimas, pertencentes à classe B de Ambler, representam um único grupo entre as beta-lactamases com íons zinco em seu sítio ativo, além de constituírem uma séria ameaça devido a sua capacidade de ser transmitido entre si mesmo, bem como entre diferentes espécies bacterianas^. Objetivos: O presente estudo tem como objetivo identificar as cepas produtoras de metalo-beta-lactamases pelo método fenotípico e pesquisar a presença dos genes blaSPM-1, blaIMP-1 e blaVIM-1 em isolados de Pseudomonas aeruginosa de um hospital de Santa Cruz do Sul-RS. Metodologia: Trata-se de um estudo transversal e observacional, onde foram avaliados 15 isolados de Pseudomonas aeruginosa de aspirado traqueal de pacientes atendidos na UTI adulta, no período junho a dezembro de 2010. A identificação bioquímica das bactérias foi realizada segundo protocolo da ANVISA e o antibiograma pelo método de ágar difusão em disco conforme as instruções do Clinical and Laboratory Standars Institute. O perfil de suscetibilidade dos isolados foi realizado utilizando os seguintes antimicrobianos: amicacina (30μg); aztreonam (30μg); cefepima (30μg); ceftazidima (30μg); ciprofloxacina (5μg); imipenem (10μg); piperacilina-tazobactam (75/10μg) e tobramicina (30μg). A triagem fenotípica foi feita pelo teste de aproximação de discos segundo o protocolo de Aawaka et al. (2000) com modificações baseadas em Mendes et al. (2006) utilizando discos de ceftazidima e imipinem como substratos e como inibidor o ácido etilenodiaminotetracético (EDTA). Já a presença dos genes blaSPM-1, blaIMP-1e blaVIM-1 foi verificada através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), sendo previamente realizada a extração do DNA através do método modificado de Marmur (1961). Resultados: A maior taxa de sensibilidade foi observada pela piperacilina/tazobactan (100%), seguida da amicacina (86,67%) e trobamicina (80%). Já a maior resistência ocorreu na presença de aztreonam (33,33%), imipinem (26,67%) e ciprofloxacino (26,67%). Dentre as cepas analisadas que foram resistentes a cefalosporinas de 3ª geração e/ou a carbapenêmicos nenhuma demonstrou produção de metalo-beta-lactamases através do teste fenotípico, e a presença dos genes blaSPM-1, blaIMP-1 e blaVIM-1 não foi detectada. Conclusão: Estudos demonstram a presença de metalo-beta-lactamases em cepas de Pseudomonas aeruginosa, em várias regiões do país e do mundo, podendo ser significativamente diferentes em áreas geográficas distintas, mesmo entre os diferentes hospitais na mesma área. Porém ainda as Pseudomonas aeruginosa de Santa Cruz do Sul não são produtoras de metalo-beta-lactamases, mas certamente são produtoras de outros mecanismos de resistência, o que implica em análises mais complexas.