DESENVOLVIMENTO DE UM KIT DE EXTRAÇÃO DE DNA: RESULTADOS E COMPARAÇÃO DE CUSTOS COM KITS COMERCIAIS

Resumo

Atualmente vários estudos são realizados a partir do material genético, portanto é necessária a extração de DNA ou RNA como a primeira etapa deste processo.  Os custos de kits comerciais para extração de DNA são onerosos, tornando-se, muitas vezes, inviável à aquisição quando se trabalha com grande quantidade de amostras. Diante da atual situação financeira que a pesquisa brasileira vem enfrentando, é fundamental que novas estratégias para redução de custos sejam desenvolvidas. O objetivo foi de desenvolver um kit de extração de DNA focado no processo de extração de DNA de biópsia e comparar o custo deste novo kit com o custo de um kit comercial. Foi desenvolvido um kit de extração de DNA de biópsia  in  natura adaptado do   protocolo de extração de Tost e colaboradores (2003). Foram produzidas e testadas as seguintes soluções: lise celular e lise nuclear (soluções de sais para romper a membrana celular), solução de purificação (solução alcoólica com função de precipitar restos celulares) e solução de reidratação, usou-se também uma enzima para ajudar no processo de digestão enzimática. Foram testadas 28 amostras de biópsia obtidas de tumor de colorretal de pacientes atendidos em Hospital de referência para tratamento de câncer da região do Vale do Rio Pardo. No decorrer das cirurgias, uma pequena quantidade de amostra era retirada e acondicionada em tubo de coleta com T.E. (Tris-HCl10 mM pH 8,0; EDTA 1 mM) e posteriormente transportada em temperatura ambiente para o laboratório do Centro de Pesquisa e Treinamento em Biotecnologia (CPTBio). As amostras foram testadas com o kit desenvolvido e testadas com o kit comercial. O custo de produção do kit foi calculado com base em dois valores de referência dos produtos utilizados para a preparação dos reagentes e se incluiu também o preço de produção da água utilizada (agua tipo I) e depreciação dos equipamentos utilizados. Finalizando o processo de produção do kit os valores finais obtidos por amostra foram comparados aos valores dos kits comerciais com o mesmo propósito (Promega e Invitrogen). Após a produção do kit, as analises foram realizadas com as amostras tumorais e observou-se que o DNA extraído teve alta qualidade e quantidade sendo equivalente aos valores encontrados com o kit comercial testado. Em relação à estabilidade de pH dos reagentes,  apresentaram um padrão de eficiência até 3 meses após produção, sendo que todos tiveram que ser armazenados em temperatura controlada de 4Cº a 7ºC. Em relação ao custo de produção do kit, o mesmo foi de R$ 2,88  para cada  amostra, enquanto o  valor do kit comercial testado é de R$ 8,47 por amostra, ou seja, vezes mais elevado que o kit in house. Foi possível obter um kit de extração com um valor 66% mais baixos que o kit comercial sendo a eficiência similar aos comerciais. Novos estudos devem ser realizados para avaliar em tempos maiores a estabilidade dos reagentes para determinação do prazo de validade.