O Papilomavírus humano (HPV) é um vírus DNA pertencente à família Papillomaviridae, sendo responsável por uma das mais frequentes doenças sexualmente transmissíveis  (DST) na população. Atualmente, mais de 200 tipos são reconhecidos, dos quais 30 podem infectar o trato anogenital. Os subtipos de HPV estão divididos em dois grupos de acordo com o seu potencial de oncogenicidade: os de baixo risco, como o HPV tipo 6 e 11 e os de alto risco oncogênico, como o HPV tipo 16 e 18. Os tipos de alto risco oncogênico, quando associados a outros cofatores, têm relação com o desenvolvimento das neoplasias intraepiteliais e do câncer invasor do colo uterino, da vulva, da vagina, da região anal e da orofaringe. Um grande número de métodos estão disponíveis para a detecção do vírus e para identificação das alterações celulares como o exame de Papanicolau, histopatológico (biopsia), biologia molecular (captura híbrida e PCR), porém a técnica de PCR é considerada a mais sensível por conseguir detectar os subtipos de HPV. Objetivou-se padronizar uma PCR em tempo real para a genotipagem de HPV 6-11, HPV 16 e HPV 18, utilizando controle interno. Para padronização da técnica de PCR real time foram utilizadas amostras positivas para HPV, provenientes de mulheres recrutadas no Ambulatório de Ginecologia no Hospital Santa Cruz. Para o HPV 18 e HPV 16 utilizou-se o DNA extraído a partir de células HeLa e SiHa, respectivamente, contaminadas com HPV 18 e 16. A qPCR utilizou fluoróforo Gotaq® que foi padronizada conforme instruções do fabricante: 12,5 µl de Gotaq® qPCR Master Mix, 1µl dos primers forward e reverse a 20 p/mol, 0,2 µl de CXR e 2 µl de DNA a 30 ng/µl. Foi utilizado os equipamentos StepOnePlus (Applied Biosystems) e DNA technology e as condições de temperatura e ciclagem foram: desnaturação 95°C por 2’, 40 ciclos de amplificação com desnaturação de 95°C por 15”, anelamento e extensão de 60°C por 1’. A curva de melting do StepOnePlus consiste em um ciclo de 95°C por 15”, seguido de 60°C por 1’, e 95°C por 15” com transição de uma média de 0.3°C/s. E para o DNA tchnology a curva de melting é de 95°C por 15’’ por 100 vezes. Padronizou-se uma reação com o controle interno (CI) RNAse P para o HPV 16 e HPV 6-11. A Tm para HPV 16 foi de 78,5°C e o CI com Tm de 83-85°C, para HPV 11-6  a Tm foi de 78°C e CI com Tm de 81-84°C. A padronização da genotipagem do HPV 18 + CI (Controle Interno) não foi possível devido as Tm (Temperaturas de melting) serem muito próximas para os dois alvos, apresentando uma Tm entre 80 - 84°C, não sendo possível fazer a distinção dos alvos. Foi possível padronizar, pelo método PCR em tempo real, a identificação do HPV 6-11 e HPV 16 utilizando o CI nos equipamentos StepOnePlus (Applied Biosystems) e DNA technology. Não foi possível padronizar pelo método de PCR em tempo real a genotipagem do HPV 18 com o CI.