O ferro é um elemento essencial para a função central no metabolismo energético celular. Ademais, evidências indicam que concentrações de ferro elevadas apresentam uma correlação linear com a citotoxicidade celular. Estudos também têm reportado uma associação entre o metabolismo da glicose e a sobrecarga de ferro. O ferro afeta o metabolismo da glicose, assim como o metabolismo da glicose pode influenciar no metabolismo do ferro. Neste trabalho, objetivou-se analisar a viabilidade celular em células de glioblastoma tratadas com ferro e cultivadas em estado normoglicêmico e hiperglicêmico in vitro. As células U87 de glioblastoma humano foram cultivadas em meio Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM, Sigma-Aldrich, Brasil) suplementado com 10% soro bovino fetal (FBS, Sigma-Aldrich, Brasil) e 1% penicilina/streptomicina (Sigma-Aldrich, Brasil), e foram crescidas na presença de 5% de CO₂ em estufa a 37° C. As células foram cultivadas em placas de 12 poços. Após 24 h, as células foram distribuídas em quatro grupos: controle negativo / normoglicemia (CN); hiperglicemia (HG); sobrecarga de ferro em normoglicemia (+Fe); e hiperglicemia com sobrecarga de ferro (HG+Fe). Para induzir um estado hiperglicêmico, foi adicionada glicose a uma concentração de 35 mM; e para a sobrecarga de ferro, foi adicionado sulfato ferroso heptahidratado a uma concentração de 300 µM. As células foram tratadas por 2 horas, mantidas à 37ºC e 5% de CO₂. Após tratamento, as células foram tripsinizadas e ressuspensas em meio completo. Posteriormente, para estudar a viabilidade celular, as células foram avaliadas pelo método de contagem em Câmara de Neubauer, segundo a European Collection of Cell Cultures, utilizando o corante Azul de Trypan (0,4%). Para a análise dos resultados, os dados foram tabulados no programa Microsoft Excel® 2016, utilizando uma análise descritiva. A viabilidade celular para os diferentes grupos apresentou os seguintes valores: 380.000 células viáveis/mL para o CN; 285.000 células viáveis/mL para o grupo HG; 385.000 células viáveis/mL para o grupo +Fe; e 495.000 células viáveis/mL para o grupo HG+Fe. A relação entre o número de células totais e o número de células viáveis para os diferentes grupos apresentou os seguintes valores: 1,12 para o CN; 1,03 para o grupo HG; 1,10 para o grupo +Fe; e 1,08 para o grupo HG+Fe. A sobrecarga de ferro parece ter influenciado positivamente na viabilidade celular no estado normoglicêmico, mas negativamente no estado hiperglicêmico. Isoladamente, a sobrecarga de ferro (CN vs +Fe) e o excesso de glicose (CN vs HG) parecem influenciar positivamente na viabilidade das células U87 de glioblastoma humano, mas quando em conjunto, causam uma diminuição da viabilidade dessas células (HG vs HG+Fe). No presente estudo, foi possível observar que em estado hiperglicêmico, o tratamento com sobrecarga de ferro diminuiu a viabilidade em células de glioblastoma. São necessários mais estudos com diferentes concentrações de ferro e tratamentos que possam interferir no estado redox da célula para confirmar nossos resultados.