SÍNTESE E AVALIAÇÃO DE AZODERIVADO DE 2-FENILBENZOXAZOL COMO SUBSTRATO FLUOROGÊNICO NA DIFERENCIAÇÃO DE CANDIDA SPP

Resumo

Nos últimos anos tem se enfatizado o uso de derivados de benzoxazois com potencial fluorogênico na fenotipagem de micro-organismos. Particularmente, 2-(2’-hidróxi, 5’-fenilazo)fenilbenzoxazol tem mostrado aplicação para estudos de caracterização morfológica de Candida sp. por microscopia de epifluorescência e de biotransformação. Entretanto, a sua baixa solubilidade compromete seu uso em meios de cultivo. Neste contexto, neste trabalho foi proposto sintetizar um derivado semelhante contendo um grupo carboxila na porção fenilazo para melhorar a solubilidade em água e verificar o seu potencial na diferenciação de espécies clinicamente relevantes de Candida spp. A síntese do derivado 2-(2’-hidroxi-5’-(4’’-carboxi)fenilazofenil)benzoxazol (HFAZBO-CO₂H) foi avaliada através de duas estratégias sintéticas: Rota 1: construção do núcleo benzoxazol por condensação de ácido salicílico com 2-aminofenol (2AF) em ácido polifosfórico (PPA) seguida de diazotação com ácido 4-aminobenzoico (PABA); Rota 2: diazotação do ácido salicílico com PABA, seguida por condensação com 2AF e PPA. A caracterização parcial dos intermediários e dos produtos, após recristalização, foi efetuada por Espectroscopia de Absorção Molecular na Região do Infravermelho com transformada de Fourier (FT-IR) via reflectância total atenuada (ATR, 4000-650 cm-1, 4 scans) e por Ponto de Fusão em fusiômetro. Posteriormente, o derivado HFAZBO foi testado como substrato fluorogênico (SF) em dois ensaios com 14 cepas de Candida spp.: C. albicans, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis, C. stellacoides, C.tropicalis, cultivadas inicialmente em ágar Sabouraud. No primeiro ensaio, as leveduras foram inoculadas em placas com 10 mL de ágar nutriente e glicose 1% adicionado de 0,1 mL de solução do SF (0,05mmol em dimetilsulfóxido-DMSO) tendo como controle cultivo semelhante sem adição de SF. As placas foram incubadas a 35-37°C por 48 horas e analisadas sob lâmpada uv 360 nm. No segundo ensaio as amostras foram inoculadas em duplicatas em tubos contendo 2 mL de caldo Sabouraud e incubadas a 35-37°C por 24h. Em seguida, foi adicionada alíquota de 50 µL de HFAZBO-CO2H diluído em DMSO. No dia seguinte, as amostras foram submetidas à extração com 2 mL de solução saturada de cloreto de sódio e 0,5 mL de acetato de etila. O sobrenadante resultante, foi aplicado em cromatoplaca e submetido à análise por cromatografia em camada delgada (CCD) juntamente com HFAZBO-CO₂H e 2-(2’-hidroxi-5’-aminofenil)benzoxazol) utilizando mistura de hexano:acetato de etila, 4:1. A rota de síntese utilizada na obtenção de HFAZBO-CO₂H resultou em um produto em 78,07% de rendimento. Os espectros de FT-IR resultantes da análise do produto de síntese demonstraram a presença de bandas condizentes com a estrutura molecular de HFAZBO-CO₂H. Este composto apresentou faixa de fusão de 158ºC-171ºC. Nos ensaios em placa houve produção de fluorescência em torno de quase todas as amostras de Candida spp. O ensaio em caldo, não apresentou sinais de biotransformação com as espécies utilizadas. Os resultados indicam que novas adequações estruturais devem ser propostas para alcançar o potencial discriminatório entre cepas de Candida spp pelo derivado heterocíclico em questão.