Na agricultura denominada orgânica, são utilizados biopesticidas como o óleo de Ninn, cujo o princípio ativo é a azadiractina presente em formulações comerciais como Azamax®. A azadiractina é classificada como medianamente tóxica e pouco perigosa ao meio ambiente, porém ensaios de genotoxicidade, avaliando os seus efeitos são raros. Danio rerio (Zebrafish ou paulistinha) é um pequeno peixe exótico de água doce utilizado como modelo para avaliação de substâncias químicas com ensaios toxicológicos e de embriogênese. O Ensaio Cometa (EC) pode ser uma ferramenta complementar aos ensaios normatizados para contribuir na avaliação da genotoxicidade. O objetivo deste trabalho foi utilizar D. rerio como modelo de vertebrado para avaliar a genotoxicidade da azadiractina utilizando Azamax® através do EC. O teste de genotoxicidade foi baseado na norma da ABNT-NBR 15499 que estabelece o protocolo de toxicidade crônica de curta duração (7 dias) para peixes. Foram adquiridos comercialmente exemplares de D. rerio, todos da mesma linhagem e aclimatados durante três semanas (25±2°C, fotoperíodo de 12h e renovação de 1/3 de água a cada 48h). Cinco grupos foram expostos, nas mesmas condições da aclimatação a saber: controle negativo (CN), controle positivo (CP) e três testes (concentrações de Azamax® 6µg/mL; 3µg/mL; 1,5µg/mL). Pelo menos 5 exemplares de cada grupo foram removidos nos seguintes tempos: 24, 48 e 168h para o teste. Foi utilizada a versão alcalina do EC adaptado Singh et al. (1988). Para a realização da coleta da amostra de sangue, um exemplar por vez foi transferido para um becker com dH2O e gelo para dessensibilização. Logo após, foi feito um corte único separando a cabeça do corpo para a obtenção do sangue coletado com o auxílio de micropipeta. O sangue foi transferido para meio RPMI (1:100) e 30 µL foram misturados a agaroselow-melting e pipetados sobre lâminas de microscopia pré-cobertas com agarose. As lâminas são colocadas em solução de lise para desenovelamento seguido de eletroforese (20 min, 300mA, 25v). As lâminas foram neutralizadas, fixadas e coradas com Nitrato de Prata. As análises foram realizadas em 100 nucleoides por lâmina, totalizando 500 nucleoides sendo classificados em cinco classes de 0 a 4, sendo "0" ausência de dano e "4" dano máximo.Foram obtidos os parâmetros Frequência de Dano (FD) e o Índice de Dano (ID). Os resultados foram analisados através do teste não-paramétrico Mann-Whitney com nível de significância de 5% comparando-se os grupos testes em relação ao CN. No presente trabalho iniciamos os testes com um valor 8 vezes menor do que a menor concentração de uso do Azamax®, que é comumente utilizado em lavouras orgânicas. Todas as concentrações de Azamax®testadas, tanto para FD como ID apresentaram resultados significativamente aumentados em relação ao CN. Esses resultados persistiram do início ao final do teste. O aumento do FD e ID, já em 24 horas e a manutenção desse efeito de genotoxicidade ao final do experimento sugerem que o composto ativo, azadiractina, presente neste biopesticida persista na água tendo efeitos genotóxicos diretos ou através de seus catabólitos nos sistemas biológicos do peixe modelo do experimento. A utilização de biopesticidas, mesmo os classificados para utilização na agricultura orgânica, requerem mais pesquisas para atestarem a sua segurança pelas autoridades de saúde de modo a proteger e informar possíveis riscos tanto para os usuários quanto como para os consumidores.