ANÁLISE DA EFICIÊNCIA DE EXTRAÇÃO DE RNA ATRAVÉS DE PROTOCOLO COMERCIAL MANUAL E EM AUTOMAÇÃO

Resumo

Introdução:  A doença causada pelo SARS-CoV-2 (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2), conhecida como COVID-19, representa uma séria ameaça à saúde global, e é responsável por ocasionar doenças respiratórias e entéricas, sendo associada às infecções agudas e graves. Diante disso, a realização dos exames e o correto diagnóstico para confirmação de novos casos impactam diretamente na doença. A principal técnica de diagnóstico para a COVID-19 consiste na detecção molecular pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (RT-PCR) e a extração de ácidos nucleicos é uma etapa fundamental para se obter alta eficiência de amplificação nos protocolos que usam a reação em cadeia da polimerase. A extração de RNA a ser empregada na PCR com fins de diagnóstico deve seguir um protocolo em que a obtenção de amostras de alta pureza é fundamental. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência kit comercial ?MagMAX CORE Nucleic Acid Purification Kit? para extração de RNA viral e compará-lo com seu uso manual e em automação. Metodologia: As amostras biológicas são provindas da rotina de diagnóstico da COVID-19, implementada recentemente para apoiar o município de Santa Cruz do Sul no controle da pandemia. Os dados foram coletados do banco de dados do Laboratório, e inclui os testes realizados no período de 22/04/2020 a 23/09/2020. A extração dos ácidos nucleicos foi realizada em dois equipamentos diferentes automatizados, King Fischer? da Termo Fischer e Extracta? 32 da Loccus e manualmente. Os resultados da extração foram mensurados com base na amplificação do gene controle da RNA Polimerase (RP). Principais resultados: a partir das análises preliminares foram analisadas 1.489 amostras em que 852 foram extraídas utilizando o equipamento King Fischer? e obteve a eficiência de 96% tendo 29 extrações resultaram em RT-PCR inconclusivas. Já manualmente, foram extraídas 568 amostras e foi observado 94% tendo 33 extrações que resultaram em RT-PCR inconclusivas. Em contrapartida, a utilização do equipamento Extracta? 32 apresentou um aproveitamento de 100% de eficiência, entre as 69 amostras extraídas. Conclusão: conclui-se que o kit comercial ?MagMAX CORE Nucleic Acid Purification Kit? é eficiente para extração de ácidos nucleicos virais, tendo um maior aproveitamento utilizando-se o equipamento Extracta? 32 da Loccus. Todavia, será necessário dar continuidade ao acompanhamento dos resultados do mesmo, tendo em vista seu uso recente no laboratório de diagnóstico.