APLICAÇÃO DE FT-IR SUPERVISIONADO POR UV-VIS PARA A QUANTIFICAÇÃO DE TRIACILGLICERÓIS SÉRICOS DE PACIENTES PRÉ-DIABÉTICOS

Resumo

O diagnóstico de alterações metabólicas em fluidos biológicos pode ser realizado pela técnica de espectroscopia no infravermelho com Transformada de Fourier (FT-IR), caracterizada pela identificação de compostos e análise de misturas com base em movimentos vibracionais. Esta técnica analítica está em constante desenvolvimento, pois permite uma rápida análise, com alto rendimento e sem destruição da amostra e vem sendo aplicada na detecção de marcadores bioquímicos, entre eles os triacilgliceróis. Os triacilgliceróis são uma das mais importantes classes de lipídios presentes no organismo humano. São sintetizados no fígado e no intestino e são as formas mais importantes de armazenamento e transporte de ácidos graxos. O presente trabalho teve como objetivo a utilização da técnica de espectroscopia de reflectância difusa no infravermelho com Transformada de Fourier (DRIFTS) para determinar a concentração de triacilgliceróis séricos de pacientes pré-diabéticos, tendo como supervisão o método enzimático colorimétrico com espectrofotômetro na região do visível (UV-VIS). As amostras de soro utilizadas para este estudo foram obtidas do banco repositório referente ao projeto aprovado pelo comitê de ética em pesquisa da Universidade de Santa Cruz do Sul, sob processo n° 2686/10. Foram obtidas 26 amostras, condicionadas por adesão voluntária, sendo sujeitos entre 18 e 59 anos, de ambos os sexos, com diagnóstico de pré-diabetes realizado nas unidades básicas de saúde do município de Santa Cruz do Sul. A determinação de triacilgliceróis foi realizada em quintuplicata pelo método enzimático colorimétrico (reação de Trinder), conforme instrução do fabricante com equipamento automático Labmax Progress (Labtest Diagnóstica) modelo standard. Alíquotas de 10 µL de soro foram misturadas a 100 mg de brometo de potássio (KBr) e adicionado 10 µL de ferricianeto de potássio (200 mg.mL^-1), utilizado como padrão interno, sendo o material liofilizado por 3 horas a 1x10^-3 Torr. Os espectros foram obtidos em quintuplicata por reflectância difusa utilizando um espectrofotômetro Spectrum 400 FT-IR/FT-NIR Spectrometer (Perkin Elmer), laser de HeNe de 633nm. Os espectros foram adquiridos na região do infravermelho médio (MIR), entre 4000 a 600 cm^-1 com uma resolução espectral de 4 cm^-1 e 16 varreduras, sendo adquiridos em absorbância e normalizados entre 0 e 1. A análise multivariada foi realizada utilizando o programa computacional Pirouette® 4.0, com aplicação da análise de regressão por mínimos quadrados parciais (PLS) para prever os valores de triacilgliceróis utilizados como conjunto de previsão, utilizando validação cruzada com pré-processamento centrado na média. Das 26 amostras analisadas, apenas 7 apresentaram níveis de triacilgliceróis superior a 150 mg.dL^-1. As amostras utilizadas para o modelo de previsão variaram entre 59,74 a 354,69 mg.dL^-1. A análise foi realizada utilizando à faixa espectral de 4000-2400 e 2300-600 cm^-1, obtendo-se modelo PLS com um coeficiente de correlação (R²) de 0,999088 e 3,36 mg.dL^-1 para raiz quadrada do erro quadrático médio de validação cruzada (RMSECV). Verificou-se que a técnica DRIFTS, associada ao método de calibração PLS, foi adequada para a construção do modelo de calibração e para a quantificação de triacilgliceróis.